雅安藏茶從屬于四川邊茶，主銷西藏等邊疆地區(qū)，邊疆少數(shù)民族有“寧可三日無食，不可一日無茶”的說法，可見，四川邊茶在邊疆少數(shù)民族生活中的重要地位。姜波等研究表明，貯存有一定時期的四川邊茶其抑制脂肪酸合酶活性的效果隨著貯存時間的延長而不斷增加，說明貯存過程會影響藏茶的品質。而貯存過程中品質的變化也與微生物的種群有一定的關系，研究藏茶貯存過程中的真菌微生物種群，對藏茶貯存方法的改進及品質提高具有重要意義。因此，本試驗對藏茶進行了貯存過程中的真菌分類學地位鑒定，以期為藏茶貯存過程中品質變化的機理提供生物學方面的理論參考，為貯存時期安全保存及促進品質的轉化提供理論依據(jù)。
1、材料與方法
1．1材料藏茶由四川雅安市茶葉有限公司提供。
1．2試驗方法1．2．I培養(yǎng)基的配制參照《微生物學實驗手冊》進行馬丁(Martin)孟加拉紅鏈霉素瓊脂培養(yǎng)基的配制。
1．2．2真菌的分離純化1)微生物菌懸液梯度的制備參照按GB／T4789．2—2o03《食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定》l5進行；2)微生物的分離培養(yǎng)采用馬丁(Martin)孟加拉紅鏈霉素瓊脂培養(yǎng)基37℃下黑暗培養(yǎng)，采用平板涂布法；3)微生物的純化培養(yǎng)參照《中國真菌志》[6的標準培養(yǎng)法：察貝克瓊脂培養(yǎng)基(cYA)25。C下黑暗培養(yǎng)7d。1．2．3真菌的分類鑒定按照《微生物學實驗手冊》《中國真菌志》。和《真菌鑒定手冊》進行真菌鑒定。
2、結果與分析
通過對雅安藏茶貯存過程中存在的真菌種群進行分類學地位鑒定，共發(fā)現(xiàn)1類曲霉菌、3類青霉菌及1類根霉菌。其中，曲霉菌是藏茶中的優(yōu)勢類群。2．1曲霉菌(Aspergillusniger)黑曲霉是一種低等真核生物，屬于半知菌亞門(Deuteromyeotina)、絲孢綱(Hyphomycetes)、絲孢目(Hyphomycetales)、叢梗孢科(Moniliaceae)、曲霉屬(Aspergillus)，是世界公認的安全可食用性菌種，在工業(yè)生產和學術研究中占有重要的地位。作為參與藏茶貯存過程中品質形成的重要菌種，足藏茶貯藏過程中數(shù)量最多的一類微生物，研究其生命周期及其代謝產物變化有著重要意義。從藏茶貯存過程中分離的黑曲霉形態(tài)結構(圖1)看出，黑曲霉的菌落在cYA(察貝克瓊脂培養(yǎng)基)上生長迅速，25C下培養(yǎng)7d后，直徑為50～70mm，少數(shù)菌株生長較局限，多數(shù)生長較快，菌落平坦或中心稍凸起，有規(guī)則或不規(guī)則的輻射狀溝紋，質地絲絨狀或稍呈絮狀，有的菌株偶有過度生長現(xiàn)象，產生大量分生孢子，表面呈暗褐黑色至炭黑色；滲出液有或無，無色；具或不具霉味。菌落反面無色或呈不同程度的黃色、黃褐色或帶微黃綠色。分生孢子頭初為球形至輻射形，分生孢子球形或近球形。較多，分生孢子面的邊緣呈現(xiàn)藍綠色，菌絲體淡灰白色，滲出液缺乏，可溶性色素缺乏。2．2．3巴恩正青霉菌(Baenpenicillium)巴恩正青霉菌形態(tài)結構如圖4所示，巴恩正青霉菌在CYA上25C培養(yǎng)7d后，直徑25～36mm，規(guī)則或不規(guī)則的放射狀皺紋較多或大量產生，中心有或無臍狀突起；質地絨狀兼絮狀和顆粒狀；分生孢子結構通常稀少或很少，不影響菌落面的顏色，偶有分離物則較多，分生孢子面暗灰綠色，近于灰橄欖色；菌絲體白色至微黃色或灰白色；閉囊殼大量產生；滲出液大量產生，淡黃色，偶有缺乏者；反面磚紅色、橘褐色、黃褐色；可溶性色素缺乏。
2．2青霉菌(Penicillium)青霉屬青霉多數(shù)種在生活史中只具有無性階段，僅少數(shù)種部分存在有性階段。藏茶貯存過程中主要有光孢青霉菌、婁地青霉菌和巴恩正青霉菌出現(xiàn)。2．2．1光孢青霉菌(Penicillium glabrum)光孢青霉菌形態(tài)結構如圖2所示，光孢青霉菌在CYA上25℃培養(yǎng)7d后，直徑38～55rnm，具放射狀皺紋，質地絨狀；分生孢子大量產生，分生孢子面灰綠色，菌絲體白色，偶有分離物產生，可溶性色素缺乏。2．2．2婁地青霉菌(Penicilliu mroqueforti)婁地青霉菌形態(tài)結構如圖3所示，婁地青霉菌在CYA上25℃培養(yǎng)7d后，直徑45～65mlTl，有少量放射狀皺紋，中央有臍狀突起而其他部分平坦，邊緣較薄且不規(guī)則；質地絨狀，中心有輕微絮狀；分生孢子結構2．3根霉菌(Rhizopus)根霉屬接合菌亞門(Zygomycotina)、接合菌綱(Zygomycetes)、毛霉目(Mucorales)、毛霉科(Mu—cot)。除細菌以外，根霉是迄今為止絲狀菌中產L一乳酸的另一重要菌種。從藏茶貯存過程中分離的菌體顯微照相如圖5所示。根霉菌產生有性孢子，菌體單細胞或絲狀，無隔膜，常多核；無性階段的孢子為不動的孢囊孢子或與分生孢子相似的孢子囊。腐生，無性孢子主要為生在孢子囊中的孢囊孢子或與分生孢子相似的孢子囊(即毛霉目特征)，不形成子實體；孢子囊相似，都具有囊軸，孢子囊壁薄，孢囊孢子由孢子囊壁破裂后釋出(為毛霉科特征)。孢子囊不作燒瓶狀，孢子囊都為球形，孢子囊沒有中軸基，孢囊梗在假根的對面，從匍匐菌絲生出。
3、小結與討論
藏茶貯存過程中存在的微生物是一個復雜的體系，各種微生物在生長過程中分泌胞外酶將大分子物質降解成可溶性的小分子物質，并為自身的生長代謝提供氮源、碳源等。1)黑曲霉可產生多種酶類，如果膠酶、葡萄糖淀粉酶、纖維素酶、柚苷酶、單寧酶、葡萄糖氧化酶、糖苷酶等。其中，葡萄糖淀粉酶、纖維素酶和果膠酶，可以分解多糖、脂肪、蛋白質、天然纖維、果膠和水不溶性化合物等有機物。水解產物大多為單糖、氨基酸、水化果膠和可溶性碳水化合物。黑曲霉產生的單寧酶可分解茶葉中的單寧，解除單寧對于后續(xù)微生物的抑制起到重要作用，同時纖維素酶、果膠酶等酶類分解茶葉中的高分子碳水化合物，增加藏茶溶出物，對藏茶甘醇品質的形成起關鍵作用。2)青霉產生多種酶類及有機酸，可生產葡萄糖氧化酶或葡萄糖酸、檸檬酸、檸檬酸霉素和抗壞血酸。且青霉素發(fā)酵中的菌絲廢料含有豐富的蛋白質、礦物質和B類維生素；產黃青霉代謝產生的青霉素對雜菌、腐敗菌可能有良好的消除和抑制生長作用，因此，對藏茶醇和品質的形成可能有輔助作用。3)根霉的淀粉酶、果膠酶活力較高，能產生有機酸，還能產生芳香類物質，也能轉化甾醇族化合物的重要菌類。在藏茶中生成一定數(shù)量的根霉，有利于藏茶甜香品質的形成。等礦質元素的消耗較大,因此,AM真菌對礦質元素吸收的促進效應有利于牡丹開花。AM真菌對P和Ca的促進效應最重要,這是由于我國農田土壤中有效磷濃度低,而Ca可顯著促進牡丹的光合作用,AM真菌改善植物礦質元素營養(yǎng)的作用已得到廣泛認可,尤其是P元素,AM真菌改善植物P營養(yǎng)的效應是AM真菌與植物共生關系中最重要的基礎,也是AM真菌所具有的各種作用中最顯著和穩(wěn)定的,其他礦質元素對菌根植物的效應或機理的研究還不夠全面或穩(wěn)定本研究使用的是混合菌劑,研究表明,接種混合菌劑比單一菌劑對幼苗促進效果更顯著,而且可以擴大其應用范圍。牡丹作為觀花植物,AM真菌對其開花的促進效應為重要,由于牡丹為多年生木本植物,AM直菌對其開花的影響研究周期較長,因此,有待對AM菌對牡丹開花的直接效應以及不同菌種之間的差異作進一步研究。
出處：《貴州農業(yè)科學》2010年38卷
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